操作流程：

多層細胞培養瓶的操作流程主要包括以下幾個步驟：

1. 細胞懸液混勻：根據實驗要求制備細胞懸液，并在培養基瓶、培養瓶或其他容器中混勻。建議每層的工作容積為30-50 mL。

2. 接種細胞懸液：使用移液管緊貼瓶壁緩慢地將細胞懸液加入到細胞培養瓶中，注意避免產生泡沫或氣泡。使用10 mL移液管可以伸到培養瓶底部使培養基分散開，而25 mL移液管則只能伸到NEST標志的地方。

3. 平衡液體：將培養瓶有NEST標志的一側朝向自己，順時針傾斜45度左右放置一段時間，使瓶中各個隔層的液體達到平衡。

4. 水平放置培養瓶：輕緩地將培養瓶水平放置于工作臺上，NEST標志面朝上。

5. 晃動培養瓶：前后左右輕輕晃動多層瓶，使液體均勻分布在每層生長面上。注意晃動要輕柔，防止起泡沫和培養基滲漏到下層。

6. 移除培養液：可以選擇抽吸或傾倒培養基的方法去除培養基。抽吸時，將多層瓶傾斜45度，有NEST標記的一面朝向自己，使用10 mL或2 mL移液管抽吸培養基。

7. 細胞的收集：用緩沖液清洗一遍以去除殘留的血清，后加入消化液（每層大于5 mL），混勻。消化大約2分鐘后，用消化終止液中和消化液。采用移液管抽吸法或傾倒法將細胞懸液置于離心管等容器中。

8. 沖洗培養瓶：用一定量的緩沖液沖洗多層瓶三次，將沖洗液同時置于離心管中，混勻計數或者傳代接種。

9. 放置于CO2培養箱：最后，將培養瓶水平輕緩轉移放置于CO2培養箱中。

使用注意事項：