貼壁293T細胞和懸浮293T細胞在生物反應器中的高密度培養具有廣泛的應用價值。實驗中，我們使用片狀載體分別對293T貼壁細胞和懸浮293T細胞在固定床生物反應器中進行高密度培養。我們在實驗過程中采用連續灌流培養的方法，并借助片狀載體來支撐細胞的生長。通過連續觀察葡萄糖消耗，我們評估了細胞培養的增殖能力和細胞密度的變化。

實驗方法概要：

1. 需要的實驗室儀器和試劑：

   - 3.5L固定床生物反應器 x 2

   - 150g 片狀載體

   - 貼壁293T細胞

   - 懸浮293T細胞

   - DMEM培養基

   - 葡萄糖溶液

   - 無菌培養皿

   - 離心管

   - 顯微鏡

2. 貼壁293T細胞的培養：

   a. 在培養皿中加入足夠的DMEM培養基，并補充10%的胎牛血清。

   b. 將貼壁293T細胞接種在培養皿中，使其達到對數生長期。

   c. 用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液將細胞從培養皿中解離。

   d. 離心細胞，去除上清液，用DMEM培養基洗滌細胞。

   e. 鑒定細胞數目并調整細胞濃度至2.5×107個/mL。

3. 懸浮293T細胞的培養：

   a. 在培養皿中加入足夠的DMEM培養基，并補充10%的胎牛血清。

   b. 將懸浮293T細胞接種在培養皿中，使其達到對數生長期。

   c. 用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液將細胞從培養皿中解離。

   d. 離心細胞，去除上清液，用DMEM培養基洗滌細胞。

   e. 鑒定細胞數目并調整細胞濃度至2.3×107個/mL。

4. 固定床生物反應器的裝填：

   a. 準備2個3.5L固定床生物反應器。

   b. 在每個生物反應器中加入75g片狀載體。

   c. 用無菌操作將貼壁293T細胞接種在一個生物反應器中，將懸浮293T細胞接種在另一個生物反應器中。

5. 連續灌流培養：

   a. 連續灌流培養開始前，將生物反應器和培養基預熱至37℃。

   b. 確保培養基通過生物反應器的速度為1個床體積/小時。

   c. 每隔12小時，取出一定量的培養基樣品，用離心管離心10分鐘。

   d. 分離上清液并測定葡萄糖濃度。

   e. 根據葡萄糖消耗情況來調整培養基的流速，以維持葡萄糖濃度在合適范圍內。

   f. 持續進行連續灌流培養6天，每天觀察細胞生長情況和細胞密度的變化。

結果：

貼壁293T細胞和懸浮293T細胞均能在固定床生物反應器中生長。6天后，貼壁293T細胞的細胞密度達到2.5×107個/mL，懸浮293T細胞的細胞密度達到2.3×107個/mL，細胞的增殖約為50倍。

討論與結論：

本實驗結果表明貼壁293T細胞和懸浮293T細胞在固定床生物反應器中均能實現高密度培養。貼壁293T細胞的細胞密度稍高于懸浮293T細胞，但差異不明顯。固定床式生物反應器的連續灌流培養方法適用于兩種細胞的培養，為后續的生物工程研究提供了可行的培養工藝。該實驗方法可為進一步研究和應用貼壁和懸浮293T細胞的生物反應器培養提供參考。

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